Ventajas extraordinarias del ELISA ultrasensible con el ciclo de tio-NAD en la determinación de la proteína NS1 del dengue
1. Introducción
El dengue es una enfermedad infecciosa aguda causada por el Virus del dengue a través de la picadura de un mosquito infectado de la especie Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus), con los principales síntomas como fiebre alta, msonos, dolor de cabeza, erupción y Severo dolores (dolor en ojos, músculos, articulaciones o huesos), etc. Esta enfermedad es ampliamente prevalente en climas tropicales y subtropicales. Se estima que entre 100 y 400 millones de personas se infectan cada año, de las cuales más del 80% suelen ser leves y asintomáticas. No obstante, el dengue severo puede aumentar el riesgo de muerte si no se trata adecuadamente. Por tanto, el diagnóstico precoz de esta enfermedad es fundamental para su tratamiento oportuno.Cabe destacar que la proteína no estructural 1 (NS1), una glicoproteína altamente conservada, se secreta principalmente durante la infección de Dengue virus, que se considera intensamente como el principal factor de patogéneses de Fiebre del dengue. Por ello, el INS se utiliza generalmente como biomarcador para la detección temprana de esta enfermedad.
In thes study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) en combinación con el Thio nicotinamida adenina Dinucleótido (TIO-NAD/S-NAD) Método de ciclesmo (en adelante se denominará ELISA ultrasensible) se utiliza para detectar el INS, seguido de la comparación con el NAAT para confirmar su precesión de detección.
2. Ventajas y desventajas de los métodos tradicionales de detección para Fiebre del dengue
Actualmente, tAquí tienes cuatro métodos principales de detección para Fiebre del dengue.
Aeslamiento viral y la identificación tienen una alta especificidad pero consumen mucho tiempo, tardando al menos 5 días. El Antígeno rápido El test es el más rápido y rentable entre los otros métodos, pero la sensibilidad y la especificidad son relativamente bajas. La prueba serológica basada en IgM e IgG está limitada por el número de días de infección, como la La prueba debe retrasarse hasta que se alcance el nivel de anticuerpos sube a un nivel detectable.
En clínica, a menudo se aplica NAAT para determinar Fiebre del dengue por la suciedad de su alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, este método es caro, laborioso y propenso a falsas positividades, que debe ser llevado a cabo por personal capacitado. Para superar las desventajas de estos métodos, se introdujo un nuevo método de detección ELISA ultrasensible es Aplicado en este estudio.
3. Flujo de trabajo de ELISA ultrasensible con ciclo de thio-NAD
Un par de anticuerpos es Utilizado para capturar la proteína NS1 en el sándwich ELISA y fosfatasa alcalina es labeled on la secondary antibody. Aside from la antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH son utilizado para construir el sestema de ciclo enzimático tio-NAD. Durante la reacción de ciclo de la tio-NAD, la tio-NADH se acumulaba constantemente en parama triangular y podía medirse directamente a una absorbancia de 405 nm.
4. La comparación de ELISA ultrasensible y NAAT en la detección de la proteína NS1 del dengue
En NAAT, 60 muestras son positivas para dengue y 25 negativas. El valor del umbral de ciclo (CT) de las muestras positivas para dengue osciló entre 12,42 y 31,41. En el ELISA ultrasensible, 59 muestras son correspondientemente positivas a los resultados NAAT, mientras que 25 muestras son completamente negativas a los resultados NAAT.En comparación con el NAAT, la sensibilidad y especificidad del ELISA ultrasensible son del 98,3% y 100%, respectivamente (Tabla 2). De 60 muestras de pacientes positivos para dengue confirmados con NAAT, solo 1 muestra es negativa en el ELISA ultrasensible. Los datos de la NAAT mostraron que la muestra es un caso de infección tipo 4 por DENV con un valor de TC de 21,59. Los resultados del ELISA ultrasensible están en casi perfecta concordancia con los resultados de NAAT, con un valor kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Conclusión
UEl método ELISA Itrasensitive es fácil de realizar y no requiere paramación profesional para su funcionamiento. TLa detección de HE puede iniciarse inmediatamente después de recibir una pequeña muestra. Es especialmente adecuado para la detección temprana de Dengue enfermedad en Países de bajos ingresos.Referencia
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method para Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Ventajas del producto y características de BONTAC Thio-NAD/S-NAD
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