Un método científico para cuantificar NMN en muestras biológicas
1. Introducción
Suplementación deMononucleótido de nicotinamida (NMN)para aumentar la regulación de laNivel deDinucleótido de adenina nicotinamida (NAD+)se ha presentado como una prometedora intervención antienvejecimiento. Sin embargo, sigue siendo un desafío serio para ser precisocuantificar los intermedios NAD+, NMN en particular. Este estudio está impulsado para introducir un método novedoso, la metodología LC-MS/MS mediada por doble isótopo (dimeLC-MS/MS), para la cuantificación precisa deNMN en muestras biológicas.2. Factores que afectan la detección precisa de NMN
El NMN es difícil de detectar con precisión debido a su vulnerabilidad a las enzimasdegradación, conversión en el procesamiento de muestras, sus comportamientos complejos en diferentes condiciones de columna y extracción, así como el efecto matricial.
Específicamente, el NMN tiene propiedades de alta polaridad y baja volatilidad, que es fácil de disolver en agua pero difícil de disolver en disolventes orgánicos. Estas propiedades restringen enormemente la aplicación de muchos métodos convencionales de análisis cuantitativo.
BMuestras iológicascomo la sangre tiene actividades significativas de CD38 y CD73 (ecto-5’-nucleotidasa), ambas podrían usar NMN como sustrato.
El comportamiento de NMN en la columna es muy complejo, probablemente debido a la naturaleza bipartita de sus cargas, por lo que diferencias sutiles en las condiciones de extracción y columna afectan significativamente la detección fiable y precisa de NMN.
3. Estrategias de afrontamiento dedimeLC-MS/MS para reducir el impacto de los factores de impacto
Para evitar la interferencia de los factores mencionados, un pRototipocolumnaNMN-2 se aplica. Esta columnaconteners Partículas de sílice de alta pureza basadas en C18 que son más capaces de unirse a compuestos hidrofílicos que a partículas de carbono, mejorando la capacidad de separación.PÁcido erclorórico (PCA) se emplea ya que puede extraer eficientemente NAD+ y NMN de muestras biológicas como plasma con un mínimo Pérdidas.
Para ajustar los efectos matricial,a cantidad fija (1 μM) de cada uno Compuesto isotópicois añadidos aBiológico muestras anteriores a la extracción PCA.
4. La ventajas de dimeLC-MS/MS
Dnormas NMN isotópicas de ouble, NMN (M + 14) y NMN (M + 5), en la metodología impulsada por LC-MS/MS, pueden trazar con precisión el destino de NMN durante el procesamiento de muestras, queAumenta significativamente la precisión y fiabilidad de la medición de NMN en muestras biológicas. Además, dimeLC-MS/MS puede evaluar la eficiencia de extracción y las concentraciones absolutas de NMN en diferentes tipos de muestras biológicas.
5. Conclusión
Thes nuevo LC-MS/MS-metodología guiada con estándares NMN isotópicos dobles puede Accurately y Reliably medir NMN en muestras biológicas. Puede utilizarse en futuros estudios sobre la ingesta de NMN.6. Referencia
No sé, Junya et al. "Cuantificación absoluta de mononucleótidos de nicotinamida en muestras biológicas mediante cromatografía líquida mediada por isótopos-espectrometría de masas tándem-dimeLC-MS/MS)." NPJ AGING, VOL. 10,1, 2. 2 ene 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1¿Por qué elegir?BONTAC?
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