NMNH: 1. "Bonzyme" Método enzimático completo, respetuoso con el medio ambiente, sin residuos de solventes nocivos en polvo de fabricación. 2. Bontac es el primer fabricante en el mundo en producir el polvo NMNH en el nivel de alta pureza, estabilidad. 3. Tecnología exclusiva de purificación de siete pasos "Bonpure", alta pureza (hasta el 99%) y estabilidad de producción de polvo NMNH 4. Fábricas propias y obtuvo una serie de certificaciones internacionales para garantizar la alta calidad y el suministro estable de productos de polvo NMNH 5. Proporcionar un servicio integral de personalización de soluciones de productos
NADH: 1. Método enzimático completo Bonzyme, respetuoso con el medio ambiente, sin residuos de solventes nocivos 2. Tecnología exclusiva de purificación de siete pasos Bonpure, pureza superior al 98 % 3. Forma de cristal de proceso patentado especial, mayor estabilidad 4. Obtención de una serie de certificaciones internacionales para garantizar una alta calidad 5. 8 patentes nacionales y extranjeras de NADH, liderando la industria 6. Proporcionar un servicio integral de personalización de soluciones de productos
NAD: 1. Método enzimático completo "Bonzyme", respetuoso con el medio ambiente, sin residuos de disolventes nocivos 2. Proveedor estable de 1000+ empresas en todo el mundo 3. Tecnología única de purificación de siete pasos "Bonpure", mayor contenido de producto y mayor tasa de conversión 4. Tecnología de liofilización para garantizar una calidad estable del producto 5. Tecnología de cristal única, mayor solubilidad del producto 6. Fábricas propias y obtuvo una serie de certificaciones internacionales para garantizar la alta calidad y el suministro estable de productos
NMN: 1. "Bonzyme"Método enzimático completo, respetuoso con el medio ambiente, sin residuos de disolventes nocivos 2. Tecnología de purificación exclusiva "Bonpure" de siete pasos, alta pureza (hasta 99,9%) y estabilidad 3. Tecnología líder industrial: 15 patentes nacionales e internacionales de NMN 4. Fábricas propias y obtuvo una serie de certificaciones internacionales para garantizar una alta calidad y un suministro estable de productos 5. Múltiples estudios in vivo demuestran que Bontac NMN es seguro y eficaz 6. Proporcionar un servicio integral de personalización de soluciones de productos 7. Proveedor de materia prima NMN del famoso equipo David Sinclair de la Universidad de Harvard
Bontac Bio-Engineering (Shenzhen) Co., Ltd. (en lo sucesivo, BONTAC) es una empresa de alta tecnología establecida en julio de 2012. BONTAC integra investigación y desarrollo, producción y ventas, con la tecnología de catálisis enzimática como núcleo y la coenzima y los productos naturales como productos principales. Hay seis series principales de productos en BONTAC, que incluyen coenzimas, productos naturales, sustitutos del azúcar, cosméticos, suplementos dietéticos e intermedios médicos.
Como líder de laNMNBONTAC tiene la primera tecnología de catálisis de enzima completa en China. Nuestros productos de coenzima son ampliamente utilizados en la industria de la salud, la medicina y la belleza, la agricultura verde, la biomedicina y otros campos. BONTAC se adhiere a la innovación independiente, con más de170 patentes de invención. A diferencia de la industria tradicional de síntesis química y fermentación, BONTAC tiene las ventajas de la tecnología de biosíntesis verde baja en carbono y de alto valor agregado. Además, BONTAC ha establecido el primer centro de investigación de tecnología de ingeniería de coenzimas a nivel provincial en China, que también es el único en la provincia de Guangdong.
En el futuro, BONTAC se centrará en sus ventajas de la tecnología de biosíntesis verde, baja en carbono y de alto valor agregado, y construirá una relación ecológica con la academia, así como con socios ascendentes y descendentes, liderando continuamente la industria biológica sintética y creando una vida mejor para los seres humanos.
1、"Bonzyme"Método enzimático completo, respetuoso con el medio ambiente, sin residuos de solventes nocivos en polvo de fabricación
2、Exclusiva tecnología de purificación de siete pasos "Bonpure", alta pureza (hasta 99,9%) y estabilidad de producción de polvo de NMN
3、Tecnología líder industrial: 15 patentes nacionales e internacionales de NMN
4. Fábricas propias y obtuvo una serie de certificaciones internacionales para garantizar un suministro estable y de alta calidad de productos de polvo de NMN
5、Múltiples estudios in vivo muestran que el polvo de NMN Bontac es seguro y eficaz
6、Proporcionar un servicio integral de personalización de soluciones de productos
7、Proveedor de materia prima NMN del famoso equipo David Sinclair de la Universidad de Harvard.
Según un informe industrial reciente, solo varios productos de los fabricantes de NMN de todo el mundo se acercaron a cumplir con la afirmación de la etiqueta y no contienen suficiente NMN. Casi los productos tuvieron un mejor desempeño, con al menos el 88% de la etiqueta afirmando hasta pequeños excedentes. Un único producto de 250 mg fue identificado como BRL. En resumen, ChromaDex dijo que el 64% de los productos probados contenían menos del 1% de la cantidad declarada del ingrediente activo. lo que debería hacer reflexionar a los consumidores. Si bien esta es una instantánea limitada del vasto panorama de productos terminados de NMN. Permite vislumbrar la gran variabilidad de la calidad del producto disponible. La mayoría de los productos que se pueden comprar en línea contienen una cantidad tan pequeña de NMN que no se lograrían beneficios clínicos con la dosis. Otra preocupación con estos productos adulterados es que no se conoce el contenido real y podría representar un riesgo para el usuario, dijo la compañía en un comunicado.
El polvo de NMN en general se produce típicamente a través de síntesis química o enzimática, o biosíntesis de fermentación. Los tres métodos tienen sus pros y sus contras.
La síntesis química es costosa y requiere mucha mano de obra, y todas las materias primas utilizadas se clasifican como "no naturales", es decir, no provienen de sistemas biológicos. Sin embargo, existen algunas ventajas desde el punto de vista del fabricante. El rendimiento se adapta bien a la producción masiva de polvo de NMN, y todas esas materias primas no naturales se pueden controlar cuidadosamente. Pero también hay una serie de inconvenientes. Algunos de los disolventes utilizados en el proceso de fabricación son muy malos desde el punto de vista medioambiental, y las impurezas y los subproductos pueden ser difíciles de eliminar del producto acabado, lo que es muy malo para el consumidor.
La producción enzimática de polvo de NMN, por otro lado, se considera un "método de preparación verde". Al igual que la ruta química, es cara, pero ofrece un mayor rendimiento y una pureza impresionantemente alta. El NMN terminado cumple todos los requisitos: estable, de fácil absorción, ligero, de baja densidad y con una estructura molecular baja.
La fermentación también se ha explorado como un método para producir NMN, pero el rendimiento, aunque de alta calidad, es bastante abismal, por lo que muchas empresas de suplementos buscan con bastante sensatez otros procesos más eficaces.
1. Proceso de producción de materias primas
La catálisis de bioenzimas es un método de producción popular en la industria. Tiene un umbral alto y varias enzimas catalíticas clave son caras, ya que representan aproximadamente el 80% del costo total del proceso de producción, pero también es el método de producción más seguro y eficiente. En la producción de NMN por catálisis de bioenzimas, el uso de materias primas de grado alimenticio es una parte importante del proceso para garantizar la seguridad del producto y garantizar que se sigan los estándares.
2. Alto nivel de condiciones de producción
Las condiciones de producción se refieren al estándar de consumo de mano de obra requerido para completar los productos calificados de la unidad bajo ciertas condiciones de organización de producción y tecnología de producción. Existen certificaciones emitidas por las autoridades reguladoras, como cGMP en los Estados Unidos, TGA en Australia, GMP en Japón, etc.
3. Alto nivel de pruebas de productos.
Las pruebas de productos requieren métodos de prueba y reactivos fiables que se utilicen durante todo el proceso de producción. No son solo estándares de inspección para el producto final, sino también para las etapas intermedias de control, incluidas las pruebas de ingredientes activos, pruebas de metales pesados como plomo, arsénico y mercurio, y pruebas de bacterias patógenas, microorganismos y subproductos de procesamiento.
Para los productos de NMN, el método comúnmente utilizado para las pruebas de contenido de ingredientes activos es la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), que es eficiente, exacta y precisa. Para los diferentes fabricantes, los estándares para probar reactivos son diferentes. Los fabricantes estrictos comprarán reactivos de alta pureza y analíticamente puros de empresas de estándares de terceros como controles.
4.Evaluación de la seguridad
En el caso de las materias primas relativamente nuevas, como el NMN, no basta con que los consumidores juzguen la seguridad del producto únicamente por parte del comerciante. En este punto, el informe de evaluación autorizado de terceros es particularmente importante.
En la actualidad, existen dos informes genéricos de evaluación de la seguridad, uno es un informe de evaluación toxicológica y el otro es un informe de evaluación de la seguridad. En China, los informes de evaluación toxicológica suelen representar la mayoría. Sin embargo, todavía hay pocas empresas de NMN que puedan emitir este tipo de informes
5. Almacenamiento y embalaje
Los NMN generalmente se almacenan en contenedores sellados hasta por 12 meses. Si se puede almacenar durante 24 meses con cambios insignificantes en la pureza, la estabilidad del NMN es muy confiable. Actualmente, los materiales de embalaje más comunes son el pet o la esperanza, que son materiales de embalaje farmacéuticos. Son no tóxicos, inodoros, livianos, portátiles y aíslan eficazmente el aire y la humedad.
La seguridad del polvo de NMN no se puede evaluar ya que aún no se han completado los estudios clínicos y toxicológicos necesarios para establecer los niveles seguros recomendados para la administración a largo plazo. Sin embargo, su seguridad y eficacia son inciertas y poco fiables, ya que la mayoría de ellos no han sido respaldados por pruebas científicas preclínicas y clínicas rigurosas. Este problema ha surgido porque los fabricantes dudan en pagar por la investigación y los ensayos clínicos debido a la posible disminución del margen de beneficio, y no existe una agencia que autorice a regular los productos de NMN porque a menudo se venden como productos alimenticios funcionales en lugar de como medicamentos terapéuticos fuertemente regulados. Por lo tanto, los grupos de defensa del consumidor han exigido un proceso de aprobación más estricto que solicita a las agencias reguladoras que establezcan estándares y restricciones para la comercialización de productos de salud antienvejecimiento, teniendo en cuenta la seguridad, la salud y el bienestar de los consumidores. El NMN no debe considerarse como una panacea para las personas mayores, ya que aumentar los niveles de NAD cuando no es necesario puede producir algunos efectos perjudiciales. Por lo tanto, la dosis y la frecuencia de la suplementación con NMN deben prescribirse cuidadosamente en función del tipo de deficiencia relacionada con la edad y todas las demás condiciones de salud que enfrentan las personas. Se han estudiado otros precursores de NAD para descubrir la eficacia de diversas deficiencias relacionadas con la edad y se utilizan para deficiencias particulares, solo después de que se ha demostrado su eficacia y seguridad de uso. Por lo tanto, el mismo principio debe aplicarse también al NMN
Primero, inspeccione la fábrica. Después de algunas proyecciones, NMN companió que los consumidores de cara directa prestan más atención a la construcción de la marca. Por lo tanto, para una buena marca, la calidad es lo más importante, y lo primero para controlar la calidad de las materias primas es inspeccionar la fábrica. La empresa Bontac fabrica polvo de NMN de alta calidad con las categorías de SGS. En segundo lugar, se prueba la pureza. La pureza es uno de los parámetros más importantes del polvo de NMN. Si no se puede garantizar un NMN de alta pureza, es probable que las sustancias restantes superen las normas pertinentes. Como los certificados adjuntos demuestran que el polvo de NMN producido por Bontac alcanza una pureza del 99,9%. Finalmente, se necesita un espectro de prueba profesional para demostrarlo. Los métodos comunes para determinar la estructura de un compuesto orgánico incluyen la espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN) y la espectrometría de masas de alta resolución (HRMS). Por lo general, a través del análisis de estos dos espectros, se puede determinar preliminarmente la estructura del compuesto.
Introducción El NADH (forma reducida de NAD+) sirve como portador de hidrógeno biológico y donante de electrones, que participa en diversos procesos fisiológicos como la síntesis de proteínas, la reparación del ADN, la síntesis y secreción de insulina, la respuesta inmunitaria y la división celular, desempeñando un papel fundamental en la promoción de la salud y la mitigación de diversos estados patológicos. Principales reacciones enzimáticas en el metabolismo del sustrato que dependen de la relación NAD+/NADH El equilibrio de la relación NAD+/NADH es vital para mantener la homeostasis de reducción-oxidación celular (redox) y modular el metabolismo energético. Varias reacciones enzimáticas en el metabolismo del sustrato se llevan a cabo de forma dependiente de la relación NAD+/NADH. Por ejemplo, las cetonas suprimen el aumento de la producción mitocondrial de ROS asociado con la lesión excitotóxica al mejorar la oxidación del NADH (es decir, la relación elevada de NAD + / NADH) en la cadena de transporte de electrones, lo que afecta directamente el nivel de NADH. NADH en el ciclo de Krebs y glucólisis El NADH se produce en la glucólisis y el ciclo de Krebs (también conocido como ciclo del ácido cítrico o ciclo del ácido tricarboxílico), que puede transferir energía para suministrar la síntesis de ATP a través del proceso de fosforilación oxidativa en la membrana interna de las mitocondrias. El ciclo de Krebs suministra NADH como transportador de electrones a la cadena de transporte de electrones en las mitocondrias, mientras que el NADH producido por la glucólisis puede ser utilizado por la L-lactato deshidrogenasa (LDH) o transportado a las mitocondrias para la homeostasis redox. Los efectos del NADH en las mitocondrias se logran mediante sistemas de lanzadera especializados (por ejemplo, malato-aspartato o glicerol-3-fosfato). Las posibles estrategias para modular el nivel de NADH Las principales vías biosintéticas de NAD/NADH incluyen la síntesis de novo a partir de triptófano (TRP), la síntesis a partir de cualquiera de las formas de vitamina B3, nicotinamida (NAM) o ácido nicotínico (NA), o la conversión de ribósido de nicotinamida (NR). En consecuencia, el nivel de NADH puede regularse mediante la reposición de precursores de NADH (p. ej. NR y NMN), la aplicación de inhibidores de la NADH deshidrogenasa, la realización de dietas ricas en ciertos nutrientes (p. ej., vitamina B3), la administración de agentes diana mitocondriales y la suplementación con NADH exógeno. Conclusión El NADH puede ser un candidato terapéutico versátil por aprovechar su capacidad para afectar la homeostasis redox, las funciones mitocondriales y las reacciones enzimáticas. Referencia Schiuma G, Lara D, Clement J, Narducci M, Rizzo R. NADH: el sensor redox en los trastornos relacionados con el envejecimiento. Señal de antióxido redox. Publicado en línea el 17 de febrero de 2024. doi:10.1089/ars.2023.0375 BONTAC NADH BONTAC se ha dedicado a la investigación y desarrollo, fabricación y venta de materias primas para coenzimas y productos naturales desde 2012, con fábricas propias y más de 170 patentes globales, incluidas 8 patentes NADH. La pureza de BONTAC NADH puede alcanzar más del 98%. BONTAC NADH se ha aplicado ampliamente en productos de salud antienvejecimiento, materias primas de reactivos de diagnóstico, kit de prueba de homocisteína HCY, investigación y desarrollo biomédico y alimentos y bebidas funcionales. Nuestros productos están sujetos a una estricta autoinspección de terceros, que son dignos de confianza. Renuncia Este artículo se basa en la referencia de la revista académica. La información relevante se proporciona únicamente con fines de intercambio y aprendizaje, y no representa ningún propósito de asesoramiento médico. Si hay alguna infracción, póngase en contacto con el autor para eliminarla. Las opiniones expresadas en este artículo no representan la posición de BONTAC. Bajo ninguna circunstancia BONTAC será responsable de ninguna manera por reclamos, daños, pérdidas, gastos, costos u obligaciones de cualquier tipo (incluidos, entre otros, los daños directos o indirectos por pérdida de ganancias, interrupción del negocio o pérdida de información) que resulten o surjan directa o indirectamente de su confianza en la información y el material de este sitio web.
Introducción El miembro 51 (SLC25A51) de la familia portadora de solutos 25 se percibe como un transportador de mamíferos, que es capaz de importar dinucleótido de nicotinamida adenina oxidado (NAD+) en la matriz mitocondrial. Sorprendentemente, la regulación al alza de SLC25A51 se correlaciona con peores resultados en pacientes con leucemia mieloide aguda (LMA), una enfermedad hematológica clínicamente agresiva con una tasa de mortalidad de más del 70% dentro de los primeros 5 años después de un diagnóstico inicial. La asociación entre la relación NAD+/NADH y SLC25A51 en las células de LMA Tanto el NAD+ (forma oxidativa) como el NADH (forma reducida) son coenzimas esenciales para el metabolismo energético celular, y la proporción de NAD+/NADH refleja la actividad metabólica y el estado de salud, lo que tiene un impacto directo en los ritmos celulares, la senescencia, la carcinogénesis y la muerte. La importación de NAD+ mitocondrial por SLC25A51 podría ser un aspecto crítico para apoyar el metabolismo mitocondrial en la tumorigénesis de la LMA. Concretamente, se observa la disminución de la relación NAD+/NADH mitocondrial y la pérdida específica de ubiquinol reducido después de la depleción de SLC25A51 en las células de LMA U937. SLC25A51 como un desacoplador redox NAD+/NADH en AML SLC25A51 funciona como un desacoplador redox de NAD+/NADH en la tumorigénesis de LMA para mantener un ciclo oxidativo de TCA y promover la glutaminólisis. El agotamiento de SLC25A51 da como resultado un mayor uso de fuentes de carbono no glutamina para apoyar el ciclo del TCA, determinado por el aumento de las proporciones de productos intermedios de TCA no marcados. SLC25A51 se requiere para una glutaminólisis robusta. En el contexto del agotamiento de SLC25A51, las células de LMA se ven obligadas a depender más de la glutamina para la síntesis de aspartato. Alivio de la LMA mediante la depleción de SLC25A51 y 5-azacitidina La pérdida de SLC25A51 conduce a una redistribución subcelular de NAD+ en las células de LMA para limitar la proliferación. La combinación de depleción de SLC25A51 y 5-azacitidina es muy eficaz para reprimir la viabilidad de las células de LMA y prolongar el tiempo de supervivencia de los ratones. Conclusión SLC25A51 puede mantener la fosforilación oxidativa mitocondrial y estimular la proliferación de células de LMA mediante la regulación de la relación NAD+/NADH en las mitocondrias, con una eficacia prometedora en el tratamiento de la LMA, especialmente en combinación con 5-azacitidina. BONTAC NAD BONTAC se ha dedicado a la investigación y desarrollo, fabricación y venta de materias primas para coenzimas y productos naturales desde 2012, con fábricas propias, más de 170 patentes globales, así como un sólido equipo de investigación y desarrollo compuesto por doctores y maestros. BONTAC tiene una rica experiencia en investigación y desarrollo y tecnología avanzada en la biosíntesis de NAD y sus precursores (p. ej. NMN y NR), con varias formas a seleccionar (por ejemplo, NAD de grado IVD sin endoxina, NAD sin Na o que contiene Na; NR-CL o NR-Malato). La alta calidad y el suministro estable de productos se pueden garantizar mejor aquí con la exclusiva tecnología de purificación de siete pasos de Bonpure y el método enzimático completo Bonzyme. Renuncia Este artículo se basa en la referencia de la revista académica. La información relevante se proporciona únicamente con fines de intercambio y aprendizaje, y no representa ningún propósito de asesoramiento médico. Si hay alguna infracción, póngase en contacto con el autor para eliminarla. Las opiniones expresadas en este artículo no representan la posición de BONTAC. Bajo ninguna circunstancia BONTAC será responsable de ninguna manera por reclamos, daños, pérdidas, gastos, costos u obligaciones de cualquier tipo (incluidos, entre otros, los daños directos o indirectos por pérdida de ganancias, interrupción del negocio o pérdida de información) que resulten o surjan directa o indirectamente de su confianza en la información y el material de este sitio web.
1. Introducción Las mitocondrias son el centro del metabolismo energético de los cardiomiocitos, que son necesarios para mantener la contractilidad miocárdica y la función cardíaca normales. Normalmente, el desarrollo de enfermedades cardiovasculares suele ir acompañado de disfunción mitocondrial. Se sabe que el deterioro de la autofagia causa disfunción mitocondrial e insuficiencia cardíaca, en parte debido a la alteración de la mitofagia y el control de la calidad de las proteínas. En particular, la reposición externa de los precursores de nicotinamida adenina dinucleótido (NAD+) puede mejorar la autofagia y el control de calidad mitocondrial para mantener la salud metabólica y, por lo tanto, regular la función mitocondrial y cardíaca. 2. Metabolismo del NAD+ en la función mitocondrial y cardíaca Los cardiomiocitos acumulan NAD+ principalmente dentro de sus mitocondrias, donde ocurren la mayor parte de las reacciones de oxidación-reducción celular. Sin embargo, el NAD+ también está presente en el citosol y el núcleo, en los que los metabolitos derivados del NAD+ y las enzimas dependientes del NAD+ contribuyen a diversas funciones celulares. 3. Disfunción mitocondrial y cardíaca inducida por la deficiencia de NAD+ La disfunción mitocondrial y cardíaca desencadenada por la deficiencia de NAD+ se alivia en los corazones de ratón cAtg3-KO después de la administración de mononucleótido de β-nicotinamida (NMN), como lo demuestra la restauración de la actividad de la citrato sintasa (CS), la normalización parcial del nivel de ATP y la expresión de ARNm de NPPB en ratones cAtg3-KO, así como la regulación positiva del nivel de ADP en corazones de ratones WT. Además, la inhibición de NNMT puede rescatar la disfunción mitocondrial y cardíaca en ratones cAtg3-KO al restaurar el nivel de NAD+. 4. El impacto del flujo autofágico sobre la función cardíaca y mitocondrial La autofagia es una vía de degradación intracelular que recicla los componentes subcelulares, desempeñando un papel fundamental en la modulación de la homeostasis metabólica. El flujo autofágico, un mecanismo homeostático central que degrada los materiales tóxicos para los cardiomiocitos, puede mediar en la transducción de señales de SQSTM1-NF-κB-NNMT para controlar el nivel celular de NAD+, manteniendo así la función mitocondrial y cardíaca. 5. Conclusión El flujo autofágico puede ser una forma potencial de mantener el nivel celular de NAD para regular la fiuncción mitocondrial y cardíaca. . Referencia [1] Abdellatif M, Sedej S, Kroemer G. Metabolismo de NAD+ en la salud cardíaca, el envejecimiento y la enfermedad. Circulación. 2021; 144(22):1795-1817. doi:10.1161/CIRCULATIONAHA.121.056589 [2] Zhang Q, Li Z, Li Q, et al. El control de la homeostasis de NAD+ mediante flujo autofágico modula la función mitocondrial y cardíaca. EMBO J. Publicado en línea el 11 de enero de 2024. doi:10.1038/s44318-023-00009-w Acerca de BONTAC BONTAC tiene una rica experiencia en investigación y desarrollo y tecnología avanzada en la biosíntesis de NAD y NMN. Se adopta el método enzimático completo Bonzyme, que es respetuoso con el medio ambiente, sin residuos de solventes nocivos. La pureza de los productos puede alcanzar hasta el 95%, lo que se beneficia de la exclusiva tecnología de purificación de siete pasos de Bonpure. BONTAC tiene fábricas propias y ha obtenido una serie de certificaciones internacionales, donde se puede garantizar una alta calidad y un suministro estable de productos. BONTAC tiene más de 160 patentes nacionales y extranjeras, liderando la industria de coenzimas y productos naturales. En el futuro, BONTAC expandirá activamente el mercado internacional y trabajará con socios globales para promover el desarrollo próspero de la industria de la biología sintética. En esta era llena de desafíos y oportunidades, BONTAC confía en hacer mayores contribuciones a la causa de la salud humana. Renuncia Este artículo se basa en la referencia de la revista académica. La información relevante se proporciona únicamente con fines de intercambio y aprendizaje, y no representa ningún propósito de asesoramiento médico. Si hay alguna infracción, póngase en contacto con el autor para eliminarla. Las opiniones expresadas en este artículo no representan la posición de BONTAC. Bajo ninguna circunstancia BONTAC será responsable de ninguna manera por reclamos, daños, pérdidas, gastos, costos u obligaciones de cualquier tipo (incluidos, entre otros, los daños directos o indirectos por pérdida de ganancias, interrupción del negocio o pérdida de información) que resulten o surjan directa o indirectamente de su confianza en la información y el material de este sitio web.