01 Ene
Méritos extraordinarios del ELISA ultrasensible con ciclo de tio-NAD en la determinación de la proteína NS1 del dengue
1. Introducción
El dengue es una enfermedad infecciosa aguda causada por elVirus del denguea través de la picadura de un mosquito infectado de la especie Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus),con los principales síntomas como fiebre alta, mareos, dolor de cabeza, erupción cutánea yMuy fuertedolores (dolor en los ojos, músculos, articulaciones u huesos), etc. Esta enfermedad es ampliamente prevalente en climas tropicales y subtropicales. Se estima que entre 100 y 400 millones de personas se infectan cada año, de las cuales más del 80% suelen ser leves y asintomáticas. No obstante, la fiebre del dengue grave puede aumentar el riesgo de muerte si no se trata adecuadamente. Por lo tanto, el diagnóstico temprano de esta enfermedad es importante para su tratamiento oportuno.Cabe destacar que la proteína no estructural 1 (NS1), una glicoproteína altamente conservada, se secreta principalmente durante la infección deDenguevirus, que se considera intensamente como el principal factor de patogénesis deDengue. Por lo tanto, la NSI se utiliza generalmente como biomarcador para la detección temprana de esta enfermedad.
En este estudio, se realizó un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas sándwich(ELISA)en combinación con eldinucleótido de tionicotinamida y adenina (tio-NAD/S-NAD)método de ciclo (en lo sucesivo denominado ELISA ultrasensible) para detectar NSI, seguido de la comparación con NAAT para confirmar su precisión de detección.
2. Ventajas y desventajas de los métodos de detección tradicionales paraDengue
En la actualidad, tAquí hay cuatro métodos de detección principalespara Dengue.
El aislamiento y la identificación virales tienen una alta especificidad, pero requieren mucho tiempo, ya que duran al menos 5 días. La prueba rápida de antígenos es la más rápida y rentable entre los otros métodos, pero la sensibilidad y la especificidad son relativamente bajas. La prueba serológica basada en IgM e IgG está limitada por el número de días de infección, ya queelLa prueba debe retrasarse hasta que el nivel de anticuerpos aumente a un nivel detectable.
En la clínica, la NAAT se aplica a menudo para determinarDenguepor suciedad de su alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, este método es costoso, laborioso y propenso a la falsa positividad, que debe ser realizado por personal capacitado.Para superar las desventajas de estos métodos, se ha creado un nuevo método de detecciónELISA ultrasensible es aplicado en este estudio.
3. Flujo de trabajo de ELISA ultrasensible con ciclo tio-NAD
Un par de anticuerposesutilizado para capturar la proteína NS1 en el ELISA sándwich y la fosfatasa alcalinaesmarcado en el anticuerpo secundario. Además de los anticuerpos, un derivado de la androsterona, 3α-hidroxiesteroide deshidrogenasa, tio-NAD y NADHsonutilizado para construir el sistema de ciclo de enzimas tio-NAD. Durante la reacción cíclica de tio-NAD, el tio-NADH se acumuló constantemente en forma de número triangular y pudo medirse directamente a una absorbancia de 405 nm.
4. La comparación de ELISA ultrasensible y NAAT en la detección de la proteína NS1 del dengue
En NAAT, 60 muestras son positivas para el dengue y 25 son negativas para el dengue. El valor del umbral de ciclo (CT) de la NAAT de las muestras positivas para el dengue varió de 12,42 a 31,41.En el ELISA ultrasensible, 59 muestras son correspondientemente positivas a los resultados de la NAAT, mientras que 25 muestras son completamente negativas a los resultados de la NAAT.En comparación con NAAT, la sensibilidad y especificidad del ELISA ultrasensible son del 98,3% y 100%, respectivamente (Tabla 2). De 60 muestras de pacientes con dengue positivo confirmado por NAAT, solo 1 muestra es negativa en el ELISA ultrasensible. Los datos de la NAAT mostraron que la muestra es un caso de infección por DENV tipo 4 con un valor de CT de 21,59. Los resultados del ELISA ultrasensible concuerdan casi perfectamente con los resultados de la NAAT, con un valor kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Conclusión
El método ELISA ultrasensible es fácil de realizar y no requiere aprendices profesionales para operar. La detección puede iniciarse inmediatamente después de recibir una pequeña muestra. Es particularmente adecuado para la detección temprana de la enfermedad del dengue en países de bajos ingresos.Referencia
Chen, Po-Kai et al. "Método de detección avanzado para la proteína NS1 del dengue mediante ELISA ultrasensible con ciclo Thio-NAD". Virus vol. 15,9 1894. 8 de septiembre de 2023, doi:10.3390/v15091894Ventajas y características del producto deBONTAC Thio-NAD/S-NAD
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