01 Ene
Méritos extraordinarios de ELISA ultrasensible con ciclo de tio-NAD en la determinación de la proteína NS1 del dengue
1. Introducción
El dengue es una enfermedad infecciosa aguda causada por la Virus del denguea través de la picadura de un mosquito infectado de la especie Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus), con los principales síntomas como fiebre alta, mareos, dolor de cabeza, erupción cutánea y Muy fuertedolores (dolor ocular, muscular, articular o óseo), etc. Esta enfermedad es ampliamente prevalente en climas tropicales y subtropicales. Se estima que entre 100 y 400 millones de personas se infectan cada año, de las cuales más del 80% suelen ser leves y asintomáticas. No obstante, el dengue grave puede aumentar el riesgo de muerte si no se trata adecuadamente. Por lo tanto, el diagnóstico precoz de esta enfermedad es importante para su tratamiento oportuno.Cabe destacar que la proteína no estructural 1 (NS1), una glicoproteína altamente conservada, se secreta principalmente durante la infección de Dengue virus, que se considera intensivamente como el principal factor de patogenia de la Dengue. De ahí que el NSI se utilice generalmente como biomarcador para la detección precoz de esta enfermedad.
En este estudio, se realizó un ensayo de inmunoabsorción enzimática en sándwich(ELISA)En combinación con el tio nicotinamida dinucleótido de adenina (tio-NAD/S-NAD) Método de ciclado (en lo sucesivo denominado ELISA ultrasensible) se utiliza para detectar NSI, seguido de la comparación con NAAT para confirmar su precisión de detección.
2. Ventajas y desventajas de los métodos tradicionales de detección para Dengue
En la actualidad, tEstos son los cuatro métodos principales de detección: para Dengue.
El aislamiento y la identificación viral tienen una alta especificidad, pero requieren mucho tiempo, ya que tardan al menos 5 días. La prueba rápida de antígenos es el más rápido y rentable entre los otros métodos, pero la sensibilidad y la especificidad son relativamente bajas. La prueba serológica basada en IgM e IgG está limitada por el número de días de infección, ya que el La prueba debe retrasarse hasta que el nivel de anticuerpos se eleve a un nivel detectable.
En la clínica, a menudo se aplica NAAT para determinar Denguepor suciedad de su alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, este método es costoso, laborioso y propenso a una falsa positividad, que debe ser realizada por personal capacitado. Para superar las desventajas de estos métodos, se ha creado un nuevo método de detección ELISA ultrasensible es aplicados en este estudio.
3. Flujo de trabajo de ELISA ultrasensible con ciclo de tio-NAD
Un par de anticuerpos esutilizado para capturar la proteína NS1 en el sándwich ELISA y la fosfatasa alcalina esmarcado en el anticuerpo secundario. Además de los anticuerpos, un derivado de la androsterona, la 3α-hidroxiesteroide deshidrogenasa, el tio-NAD y el NADH sonutilizado para construir el sistema de ciclo de la enzima tio-NAD. Durante la reacción cíclica del tio-NAD, el tio-NADH se acumuló constantemente en forma de número triangular y pudo medirse directamente a una absorbancia de 405 nm.
4. La comparación de ELISA y NAAT ultrasensibles en la detección de la proteína NS1 del dengue
En la NAAT, 60 especímenes son positivos para dengue y 25 son negativos para dengue. El valor del umbral de ciclo (CT) de NAAT de esos especímenes positivos para dengue osciló entre 12,42 y 31,41. En el ELISA ultrasensible, 59 muestras son correspondientemente positivas a los resultados de la NAAT, mientras que 25 muestras son completamente negativas a los resultados de la NAAT.En comparación con la NAAT, la sensibilidad y especificidad del ELISA ultrasensible son del 98,3% y del 100%, respectivamente (Tabla 2). De los 60 especímenes de pacientes positivos para dengue confirmados por NAAT, solo 1 espécimen es negativo en el ELISA ultrasensible. Los datos de la NAAT mostraron que el espécimen es un caso de infección por DENV tipo 4 con un valor de CT de 21,59. Los resultados del ELISA ultrasensible concuerdan casi perfectamente con los resultados de la NAAT, con un valor kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Conclusión
El método ELISA ultrasensible es fácil de realizar y no requiere aprendices profesionales para operar. La detección se puede iniciar inmediatamente después de recibir una pequeña muestra. Está especialmente indicado para la detección precoz de la enfermedad del dengue en países de bajos ingresos.Referencia
Chen, Po-Kai et al. "Método de detección avanzado para la proteína NS1 del dengue mediante ELISA ultrasensible con ciclo de Thio-NAD". Virus, vol. 15,9, 1894. 8 de septiembre de 2023, doi:10.3390/v15091894Ventajas y características del producto de BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC es oDe las pocas empresas en el mundo, la mayoría de las empresas Chinaque puede producir Thio-NADcon "Bonzyme"Método enzimático completo(Respetuoso con el medio ambiente;Sin residuos de disolventes nocivos) y tecnología única de purificación de siete pasos "Bonpure". BONTAC integra la investigación y el desarrollo, la producción y la venta, con fábricas propias y una serie de certificaciones internacionales para garantizar una alta calidad y un suministro estable de productos.