Un método científico para cuantificar el NMN en muestras biológicas

1. Introducción

Suplementación de mononucleótido de nicotinamida (NMN) para regular al alza el nivel de nicotinamida, se ha demostrado que el dinucleótido de adenina (NAD+) es una intervención antienvejecimiento prometedora. Sin embargo, sigue siendo un serio desafío cuantificar con precisión los intermedios de NAD+, NMN en particular. Este estudio tiene como objetivo introducir un método novedoso, la metodología LC-MS/MS mediada por isótopos dobles (DIMELC-MS/MS), para la cuantificación precisa de NMN en muestras biológicas.

2. Factores que afectan a la detección precisa del NMN

El NMN es difícil de detectar con precisión debido a su vulnerabilidad a la degradación enzimática, la conversión en el procesamiento de muestras, sus comportamientos complejos en diferentes condiciones de columna y extracción, así como el efecto matriz.


Específicamente, el NMN tiene las propiedades de alta polaridad y baja volatilidad, que es fácil de disolver en agua pero difícil de disolver en solventes orgánicos. Estas propiedades restringen en gran medida la aplicación de muchos métodos convencionales de análisis cuantitativo.

Bmuestras iológicas comola sangre transporta actividades significativas de CD38 y CD73 (ecto-5’-nucleotidasa), los cuales podrían utilizar NMN como sustrato.

El comportamiento del NMN en la columna es muy complejo, probablemente debido a la naturaleza bipartita de sus cargas, por lo que las diferencias sutiles en las condiciones de extracción y columna afectan significativamente la detección confiable y precisa de NMN.

3. Estrategias de afrontamiento de dimeLC-MS/MSpara reducir el impacto de los factores de impacto

Para evitar la interferencia de los factores mencionados anteriormente, se aplica un prototipo de columna NMN-2. Esta columna contiene partículas de sílice de alta pureza a base de C18 que son más capaces de unirse a compuestos hidrofílicos que a las partículas de carbono, lo que mejora la capacidad de separación.

Se emplea ácido perclórico (PCA) ya que puede extraer de manera eficiente NAD+ y NMN de muestras biológicas como el plasma con pérdidas mínimas.

Para ajustar los efectos de la matriz, se añade una cantidad fija (1 μM) de cada compuesto isotópico a las muestras biológicas antes de la extracción del PCA.

4. La ventajasde dimeLC-MS/MS

Los patrones de NMN isotópicos dobles, NMN (M + 14) y NMN (M + 5), en la metodología impulsada por LC-MS/MS, pueden rastrear con precisión el destino del NMN durante el procesamiento de muestras, lo que aumenta significativamente la precisión y la confiabilidad de la medición de NMN en muestras biológicas. Además, dimeLC-MS/MS puede evaluar la eficiencia de extracción y las concentraciones absolutas de NMN en diferentes tipos de muestras biológicas.

5. Conclusión

Ésimoesnuevo LC-MS/MS-La metodología impulsada con patrones de NMN isotópicos dobles puede medir de manera precisa y confiable el NMN en muestras biológicas.Se puede utilizar para futuros estudios sobre la ingesta de NMN.

6. Bibliografía

Unno, Junya et al. "Cuantificación absoluta de mononucleótido de nicotinamida en muestras biológicas mediante cromatografía líquida mediada por isótopos dobles-espectrometría de masas en tándem (dimeLC-MS/MS)." npj aging vol. 10,1 2. 2 de enero de 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1

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