Detección de Dengue NS1 utilizando ELISA ultrasensible con ciclo de tio-NAD

1. Introducción

El dengue es una enfermedad infecciosa aguda causada por laVirus del denguea través de la picadura de un mosquito infectado de la especie Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus),con los principales síntomas como fiebre alta, mareos, dolor de cabeza, erupción cutánea yMuy fuerte dolores (dolor ocular, muscular, articular o óseo), etc. Esta enfermedad es ampliamente prevalente en climas tropicales y subtropicales. Se estima que entre 100 y 400 millones de personas se infectan cada año, de las cuales más del 80% suelen ser leves y asintomáticas. No obstante, el dengue grave puede aumentar el riesgo de muerte si no se trata adecuadamente. Por lo tanto, el diagnóstico precoz de esta enfermedad es importante para su tratamiento oportuno.

Cabe destacar que la proteína no estructural 1 (NS1), una glicoproteína altamente conservada, se secreta principalmente durante la infección deDenguevirus, que se considera intensivamente como el principal factor de patogénesis de laDengue. De ahí que el NSI se utilice generalmente como biomarcador para la detección precoz de esta enfermedad.

En este estudio, se realizó un ensayo de inmunoabsorción enzimática en sándwich(ELISA) En combinación con eldinucleótido de tio nicotinamida y adenina (tio-NAD/S-NAD)Método de ciclado ( en lo sucesivo denominado ELISA ultrasensible ) se utiliza para detectar NSI, seguido de la comparación con NAAT para confirmar su precisión de detección.

2. Ventajas y desventajas de los métodos tradicionales de detección paraDengue 

En la actualidad, tEstos son los cuatro métodos principales de detección:para Dengue.


Aislamiento viral y la identificación tienen una alta especificidad, pero requieren mucho tiempo, ya que tardan al menos 5 días. El Antígeno rápido es el más rápido y rentable entre los otros métodos, pero la sensibilidad y la especificidad son relativamente bajas. Las pruebas serológicas basadas en IgM e IgG están limitadas por el número de días de infección, comoella prueba debe retrasarse hasta que el nivel de anticuerpos se eleva a un nivel detectable.

En la clínica, la NAAT se aplica a menudo para determinarDengue por suciedad de su alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, este método es costoso, laborioso y propenso a una falsa positividad, que debe ser realizada por personal capacitado.Para superar las desventajas de estos métodos, se ha creado un nuevo método de detecciónELISA ultrasensible es aplicados en este estudio.

3. Flujo de trabajo de ELISA ultrasensible con ciclos de tio-NAD

Un par de anticuerposesutilizado para capturar la proteína NS1 en el ELISA sándwich y la fosfatasa alcalinaesmarcado en el anticuerpo secundario. Además de los anticuerpos, un derivado de la androsterona, la 3α-hidroxiesteroide deshidrogenasa, el tio-NAD y el NADHsonutilizado para construir el sistema de ciclo de la enzima tio-NAD. Durante la reacción cíclica tio-NAD, el tio-NADH se acumuló constantemente en forma de número triangular y se pudo medir directamente a una absorbancia de 405 nm.

4. La comparación de ELISA y NAAT ultrasensibles en la detección de la proteína NS1 del dengue

En la NAAT, 60 especímenes son positivos para el dengue y 25 son negativos para el dengue. El valor del umbral cíclico (CT) de NAAT de los especímenes positivos para dengue osciló entre 12,42 y 31,41.En el ELISA ultrasensible, 59 muestras son correspondientes positivas a los resultados de la NAAT, mientras que 25 muestras son completamente negativas a los resultados de la NAAT.

En comparación con la NAAT, la sensibilidad y la especificidad del ELISA ultrasensible son del 98,3% y del 100%, respectivamente (Tabla 2). De 60 muestras de pacientes con dengue positivo confirmadas por NAAT, solo 1 muestra es negativa en el ELISA ultrasensible. Los datos de la NAAT mostraron que el espécimen es un caso de infección por DENV tipo 4 con un valor de CT de 21,59. Los resultados del ELISA ultrasensible concuerdan casi perfectamente con los resultados de la NAAT, con un valor kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).

5. Conclusión

UEl método ELISA es fácil de realizar y no requiere aprendices profesionales para operar. TLa detección de HE se puede iniciar inmediatamente después de recibir una pequeña muestra.Es especialmente adecuado para la detección precoz deDengueenfermedad enPaíses de bajos ingresos.

Referencia

Chen, Po-Kai et al. "Método de detección avanzada de la proteína NS1 del dengue mediante ELISA ultrasensible con ciclo de tio-NAD". Virus, vol. 15,9, 1894. 8 de septiembre de 2023, doi:10.3390/v15091894

Ventajas y características del producto deBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC  es oDe estas pocas empresas, la mayoría de las empresasChinaque puede producir tio-NADcon"Bonzyme" Método enzimático completo (Respetuoso con el medio ambiente;Sin residuos de disolventes nocivos) y tecnología única de purificación de siete pasos "Bonpure". BONTAC integra la investigación y el desarrollo, la producción y la venta, con fábricas propias y una serie de certificaciones internacionales para garantizar un suministro estable y de alta calidad de los productos.

 

Renuncia

BONTAC no se hace responsable de ninguna reclamación que surja directa o indirectamente de su confianza en la información y el material de este sitio web.